凍存細胞的這些坑，你踩過嗎？

凍存細胞的錯誤時機主要有：細胞量太少，細胞狀態不好，細胞變形嚴重，或者細胞生長堆積，一旦生長過平頂期，培養基就會變得很黃，細胞可疑污染；鏡下觀察細胞有很多碎片或者不明物；培養時間過長，連續培養超過二個月，細胞性狀已有改變。

選擇細胞凍存的最佳時機：細胞增殖旺盛，情況穩定，試驗效果良好，復蘇后兩周內開始凍存一批，再往下傳的用來做實驗。

細胞太少

凍存時細胞濃度低于1- 5*10^5CELL/VIAL,復蘇很難成功,原因：細胞和細胞間會又間隙接觸反應, 解決：離心后調整細胞濃度，把細胞種更小的孔板中.

培養基很黃，凍存細胞后復蘇不長

在細胞生長平頂期凍存的細胞會在解凍后有幾天停滯狀態，原因：細胞在生長平頂期已經停止生長，凍存后也保持互相間抑制的信號，解決辦法：用胰酶消化重新鋪板；

細胞污染或者很多小黑點

凍存管的蓋子一定要擰緊，否則復蘇水浴時會滲水，造成污染。復蘇細胞的時候盡量避免凍存管接縫處沾水，防止支原體污染，實驗室定期用過氧化氫熏蒸，細胞小黑點增多時用支原體檢測試劑盒檢測，并且及時清除，趁高溫假給細胞來次清潔吧，支原體去除試劑，*防止支原體污染好幫手。

程序降溫盒導致的細胞復蘇不活

放在－80 度的凍存盒，壁太薄，細胞在被迅速降溫，使用普通的凍存液抗氧化和抗凍添加物不夠，導致細胞內產生大量冰晶殺死細胞.

推薦品牌無血清細胞凍存液，凍存液含有抗氧化因子，可在細胞凍存時防止細胞產生氧化反應，給細胞一個好的休眠環境，含有抗凍組分，讓大部分細胞免受冰晶殺戮，好不好用一下就知道！

-80°存放太久導致的細胞復蘇不好

原因：冰箱的溫度難以恒定：開門 / 關門過于頻繁，冰箱電壓不穩等.解決辦法：盡快轉入液氮。

液氮不足

液面不能漫過所有細胞。解決：定期測量液氮儲備，保證細胞全部浸在液面下，小提醒：有幾個細胞需要氣相保存的，不能浸入液氮里，挪細胞的時候需要注意一下。

取錯細胞

找不到 / 拿錯凍存管。原因：沒有標記好細胞，沒有做好庫存記錄，解決：凍存細胞時在每支凍存管都標上細胞的名稱，凍存時間，并記錄在冊。