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        細胞傷口愈合

        發布時間: 2023-01-16  點擊次數: 659次

        原理

        在單層培養細胞間制作劃痕以產生愈傷區域,然后監控該傷口周圍細胞的向劃痕遷移的現象,即傷口愈合。改變細胞遷移和/或生長的因素可以增加或降低傷口愈合率。該方法可以定量,適用于自動化系統高通量篩選。

        材料與儀器

        人MDA-MB-231細胞
        DMEM培養基 胎牛血清 PBS 戊二醛 乙醇 結晶紫
        24孔培養板 槍頭 細胞培養儀

        步驟

        1.細胞在含有10%FBS的DMEM培養基中生長。


        2.細胞以一定密度接種到24孔細胞培養板中,生長24小時后,單層細胞融合度應達到70-80%。


        3.不要更換培養基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養細胞間劃痕,劃痕橫穿過孔,槍頭盡量與板孔的底部垂直,不要傾斜。這樣產生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑相等。Gap的距離可以選用不同型號的槍頭調節。劃痕在同一方向成一條直線。


        4.在垂直與第一條劃痕的方向制作另一條劃痕,每孔劃痕成十字交叉型。


        5.劃痕后,用培養基輕輕的清洗板孔2次,以去除脫落細胞。


        6.每孔添加新鮮培養基。


        7.(培養基中含有某些成分,如抑制/促進細胞遷移和/或增殖的化學物質)


        8.細胞生長48小時(或根據時間需要)。


        9. 1xPBS清洗細胞兩次,然后使用3.7%多聚甲醛固定30分鐘。


        10. 1%的結晶紫(2%乙醇溶解)染色30分鐘。

        注意事項

        為了降低實驗結果的可變性,建議每孔選擇多個視野觀察,每組做多個重復。

        常見問題

        gap的距離可通過Photoshop或ImagJ軟件測量,為了降低實驗結果的可變性,建議每孔選擇多個視野觀察,每組做多個重復。


        以上就是本期的內容,更多資訊,歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。

         

        安培生物科技有限公司介紹:

        安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規模生物生產、基因和細胞治療領域客戶,提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產,包括培養間充質干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養規模生產服務;提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質膠產品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫藥領域提供優質的產品和技術服務,努力發展為基因治療、細胞治療的生物科技企業。

         

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