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        PCR 產物純化

        發布時間: 2023-04-21  點擊次數: 689次

        材料與儀器

        TE 或去離子水 PCR 產物
        離心機和轉子 PCR 濾 件 微量離心管

        步驟

        一、材料

        1. 緩沖液和溶液

        TE(lOmmol/L Tris-HCl,lmmol/L EDTA,pH7.5) 或去離子水

        2. 核酸和寡核苷酸

        待測序的 PCR 產物

        3. 離心機和轉子

        帶有固定傾角轉子的小型離心機,如 Eppemlorf5415C

        4. 特殊設備

        AmiconMicrocon-PCR 濾件(Millipore) 或者相當的產品,微董離心管或接收管

        二、方法

        1. 對每一個待純化的 PCR 產物,都在接收管中放置一個濾件,濾件的儲液面向上

        儲液池中加入 400ul 去離子水或 TE,注意加樣時不要觸及膜。加入 100ulPCR 產物,避免帶進礦物油。如果 PCR 產物不足 100ul, 用去離子水或 TE 補足,蓋上蓋子。

        2. 將 1 中所得組合體用帶有固定傾角轉子的離心機,l000 g 離心 15 min(例如,Eppendorf5415C 離心機上 3300r/min)。注意蓋子和管的結合部朝向轉子的中央。

        3. 移去濾件,將其放入一干凈的收集管中,有膜面朝上(如果愿意,濾件可以一直

        存到樣品分析結束)。在濾件上小心地加 20ul 去離子水或 TE,注意不要觸及膜,然后將濾件反轉過來,放回到干凈的收集管中,使帶有液體的一面朝下。

        4.1000 g 離心 2 min, 收集純化的片段。


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